한국콩연구회

다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법

요 약

본 발명은 다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법, 항

산화 활성을 증진시키는 방법 및 항암 활성을 증진시키는 방법으로 천연소재인 다시마를 첨가함으로써 다시마 무

첨가 심층수 장류에 비해 유리 아미노산의 함량을 증진시키고, 항산화 활성과 항암 활성을 증진시킬 뿐만 아니라

맛을 좋게 하는 효과가 있다.

대 표 도 – 도1

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공개특허 10-2009-0083678

(72) 발명자

오현택

서울시 노원구 월계3동 한진그랑빌 APT 122-1001

최현진

강원도 원주시 태장2동 1368-24번지

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공개특허 10-2009-0083678

특허청구의 범위

청구항 1

일반 소금 대신 해양 심층수를 건조하여 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 있어서, 부재료로 다시마 분말을 추

가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시키는 방법

청구항 2

제1항에 있어서,

상기 장류는,

된장, 간장 또는 고추장인 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시

키는 방법

청구항 3

일반 소금 대신 해양 심층수를 건조하여 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 있어서, 부재료로 다시마 분말을 추

가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류의 항산화 활성을 증진시키는 방법

청구항 4

제3항에 있어서,

상기 장류는,

된장, 간장 또는 고추장인 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시

키는 방법

청구항 5

일반 소금 대신 해양 심층수를 건조하여 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에 있어서, 부재료로 다시마 분말을 추

가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류의 암세포 저해 활성을 증진시키는 방법

청구항 6

제5항에 있어서,

상기 장류는,

된장, 간장 또는 고추장인 것을 특징으로 하는 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 아미노산의 함량을 증진시

키는 방법

명 세 서

발명의 상세한 설명

기 술 분 야

본 발명은 다시마 분말을 사용하여 해양 심층수를 사용한 장류에서 유리 <1> 아미노산의 함량을 증진시키는 방법,

항산화 활성을 증진시키는 방법 및 항암 활성을 증진시키는 방법에 관한 것이다.

배 경 기 술

<2> 해양 심층수는 태양광이 도달하지 않는 수심 200m 이상 깊은 곳의 바닷물로 그린랜드에서 발원하여

2000년 주기로 대서양과 인도양 및 태평양을 순환하는 해수자원을 의미한다.

<3> 해양 심층수는 수온이 연중 저온으로 거의 일정하고 일반 세균과 병원성 대장균등 10종류의 세균 검사

에서도 세균이 검출되지 않으며 총 생균수가 표층수의 10분의 1에서 100분의 1 정도로 매우 청정하다.

<4> 해양 심층수는 표층수에 비해 약 5~10배 정도의 무기 영양염류가 포함되어 있고, 사람의 건강에 해가

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될 수 있는 아연, 동과 같은 원소는 극소량을 포함하면서도 70종류 이상의 미네랄이 존재하여 미네랄 밸런스가

좋다. 또한, 산화-환원 반응의 반복으로 2가-3가 철이 다량 존재하기 때문에 자화처리를 하면 처리효율이 향상

되므로 양질의 활성미네랄을 만들 수 있다.

한편, 장류는 고추장, 된장 및 간장 등을 지칭하는 것으로 우리나라의 <5> 대표적인 발효 식품이자 한식 전

통요리에 없어서는 안 되는 중요한 조미료이다.

<6> 장류의 기원은 확실히 밝혀진 바 없으나 역사적 기록에 통일신라시대 초기 약 1200년 전에 장류와 유사

한 것이 있었다고 기록되어 있다. 하지만 그 후 조선 초기에 이르기까지 장류 제조법에 대한 기록이 없어 구체

적인 내용을 알 수 없다.

<7> 장류는 항산화 기능 및 항암 기능이 있다고 많이 알려져 있으며 그 효과를 증대시키기 위한 연구가 많

이 시도되어 왔다.

<8> 한편, 해양 심층수를 이용한 장류는 많이 개발되어 왔으나, 해양 심층수 장류에 여러 부재료를 첨가하

여 장류의 물리적 특성의 변화 및 기능성의 변화를 더욱 촉진시킬 수 있는 기술에 대한 개발은 미미했다.

발명의 내용

해결 하고자하는 과제

<9> 이에 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 아미노산을 증진시켜

장류의 맛을 증진시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

<10> 또한, 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 항산화 활성을 증진

시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

<11> 또한, 본 발명은 천연물 유래의 부재료를 첨가함으로써 심층수를 사용하여 제조한 장류의 항암 활성을 한층 증

진시킬 수 있는 방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

과제 해결수단

<12> 상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 일반소금 대신 해양 심층수로부터 얻은 염을 사용하여 제조한 장류에

있어서, 부재료로 다시마 분말을 추가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 해양 심층수 장류의 유리 아미노산의 함

량을 증진시키는 방법, 항산화 활성을 증진시키는 방법 및 암세포 저해 활성을 증진시키는 방법을 제공한다.

<13> 다시마는 2~3년생의 갈색 해조류로서 몸의 길이는 보통 2~4m, 폭은 20~30㎝ 내외이고 잎 바탕은 두꺼우며 거죽

이 미끄럽고 약간 쭈글쭈글한 무늬를 가진다.

<14> 다시마는 B1 , B2 , C, 니아신(Niacin) 등의 비타민과 칼슘, 인, 철, 마그네슘, 요오드 등의 무기질, 섬유질 및

점질성의 다당류를 다량으로 함유하고 있다.

<15> 다시마에 함유된 다당류는 알긴산 형태로 20~30% 함유되어 있는데, 알긴산은 콜레스테롤를 저하시키고, 중금속

방출 및 정장작용을 하며, 다량으로 함유되어 있는 산성 다당류인 후코이단(fucoidan)과 중성 다당류인 라미나

란(laminaran)은 항혈액응고, 항암 및 항AIDS 등 다양한 생리적 기능을 한다.

<16> 본 발명은 해양 심층수를 사용한 장류에 다시마 분말을 첨가함으로써 유리 아미노산의 함량을 증진시킬 수 있

고, 항산화 활성을 증진시킬 수 있으며, 항암 활성을 증진시킬 수 있음을 실시예 1~4를 통하여 입증하였다.

효 과

<17> 이상 상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 다시마를 첨가하여 제조한 해양심층수 이용 장류는 다시마 무첨가

해양 심층수 이용 장류에 비해 유리 아미노산의 함량, 항산화 활성 및 항암활성이 증진된 효과가 발휘된다.

발명의 실시를 위한 구체적인 내용

<18> 이하, 본 발명의 구성 및 작용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위

가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.

<19> <제조예 1> 다시마 첨가 심층수 장류 및 다시마 무첨가 심층수 장류(대조군) 시료의 제조

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실시예에서 사용할 된장, 고추장, 간장은 통상적 제조방법에 따라 <20> 제조하였으며 각각 장류의 대조군은

성분에 차이가 있고 그 성분은 다음과 같다.

<21> 다시마 첨가 심층수 된장은 코지, 심층수 소금, 다시마 분말 및 삶은 콩을, 다시마 무첨가 심층수 된장

은 다시마 분말은 첨가하지 않고 코지, 심층수 소금 및 삶은 콩을 첨가하여 제조하였다.

<22> 다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 분말과 심층수 소금을, 다시마 무첨가 심층수 고추장은 다시마 분

말은 첨가하지 않고 심층수 소금은 첨가하여 제조하였다.

<23> 심층수 간장은 코지와 심층수 소금이 첨가된 소금물의 비율을 1:6로 하여 제조하였다. 다시마 첨가 심

층수 간장은 다시마 분말과 심층수 소금을, 다시마 무첨가 심층수 간장은 다시마 분말은 첨가하지 않고 심층수

소금을 첨가하여 제조하였다.

<24> 이후 하기의 실시예에서 샘플로 사용하기 위해 상기에서 제조한 다시마 첨가 심층수 장류 및 다시마 무

첨가 심층수 장류로부터 메탄올 추출물을 획득하였다. 먼저 제조된 된장과 고추장을 동결건조시킨 후 시료를 마

쇄하여 20 (w/v)의 메탄올을 첨가하였다. 이것을 12시간 교반하고 3회 반복한 후 여과하여 회전식 진공 농축기

로 농축 메탄올 추출물을 얻었다. 그 후, 동결건조기를 이용하여 메탄올 추출물을 건조함으로써 하기 실험에 사

용할 샘플(시료)을 최종 획득하였다.

<25> 한편, 간장은 여과를 한 다음, 증류수로 희석을 하여 하기 실험에 사용한 샘플(시료)을 최종 획득하였

다.

<26> <실시예 1> 다시마 첨가 심층수 장류의 아미노산 함량 측정

<27> 다시마 분말과 해양 심층수 소금을 사용한 장류의 아미노산분석은 피코테그(Pico-Tag) 방법에 따라 실

시하였다.

<28> 상기 제조예 1에서 제조한 시료 (단백질 10 ㎎)의 적당량을 시험관에 넣고 0.03% 베타 멜캅토 에탄올을

함유하는 6N 염산용액 10 ml를 가한 다음, 탈기하여 밀봉하였다. 밀봉한 후, 110℃에서 24시간 가수분해하여 농

축하고 건조한 다음, 염산을 날려 보내고 pH 2.2로 맞추어 시료로 사용하였다.

<29> 상기의 전처리 한 시료 50 ㎕를 취하여 진공펌프가 장착된 피코테그 워크스테이션(Pico-Tag

workstation; Waters, USA)에서 건조한 후, 물 : 메탄올:트리메틸아민(2:2:1) 혼합용액 10 ㎕를 첨가하여 재건

조 시켰다. 재건조된 시료에 물:메탄올:트리메틸아민:페닐이소티오시아네이트(7:1:1:1) 혼합 용액 20 ㎕를 첨

가하여 페닐티오카바밀 아미노산으로 유도체화 시킨 후 다시 건조시켰다. 건조된 시료에 희석액(Waters) 250 ㎕

를 첨가하여 용해한 후 HPLC로 분석을 행하였다. 분석은 Waters 717 U6K injector, 510 pump, 680 gradient

controller, 486 흡광검출기(absorbance detector), millennium software로 이루어진 HPLC system에서 행하였

고, 칼럼은 피코태그(Pico-Tag) 칼럼 (3.9 × 150 ㎜, 4 ㎛, Waters)을 사용하였으며, 분석 중에는 47℃로 유

지하였다. 이때 이동상으로는 eluent A는 물(Waters)을 사용하였고 eluent B는 60% 아세토니트릴을 사용하였다.

<30> 하기 표 1은 심층수 된장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노산 함량의 단위는

ng/mg이다.

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표 1

<31>

해양 심층수 된장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 <32> 된장이 다시마 무첨가 심층수 된장보

다 아스파라긴, 글루타민 및 아르기닌 등의 아미노산 함량이 높게 측정되었고 총 아미노산 함량도 높게 나타났

다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량이 증진된 사실을 확인할 수

있었다.

<33> 한편, 하기 표 2는 다시마 첨가 심층수 간장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노

산 함량의 단위는 ㎍/㎖이다.

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표 2

<34>

<35>

해양 심층수 간장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 <36> 간장이 다시마 무첨가 심층수 간장보

다 글리신, 아르기닌, 알라닌 등의 아미노산 함량이 높게 나타났으며, 총 아미노산 함량도 역시 높게 측정되었

다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량을 증진시킬 수 있다는 사실을

확인할 수 있었다.

<37> 한편, 하기 표 3은 심층수 고추장 시료의 아미노산 함량을 측정한 결과이다. 측정된 아미노산의 단위는

ng/mg이다.

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표 3

<38>

해양 심층수 고추장의 아미노산을 분석한 결과, 다시마 첨가 심층수 고추장이 <39> 다시마 무첨가 심층수 고추장보다

아스파라긴, 글루타민, 아르기닌, 트립토판 등의 아미노산 함량이 높게 측정되었고, 총 아미노산 함량도 역시

높게 나타났다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 맛을 상승시키는 아미노산 함량을 증진시킬 수

있다는 사실을 확인할 수 있었다.

<40> <실시예 2> 다시마 첨가 심층수 장류의 항산화 활성 측정

<41> 산화과정 중 생성되는 자유 라디칼은 생체 내 제거 기작에 의해 대부분 소멸되지만 조직의 방어능을 초월한 자

유 라디칼은 심장병, 파킨스씨병 및 암 등의 원인되고 있다.

<42> 본 발명의 자유라디칼 소거능을 측정하기 위해 상기 제조예 1에서 제조한 시료들을 하기의 방법에 따라 항산화

활성을 측정하였다.

여러 농도의 시료를 4 mL의 메탄올에 녹여 1.5×10

-4

<43> M DPPH 용액 (메탄올 용액) 1 mL를 첨가한 다음, 30분간

방치하였고, 그 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다.

<44> RC50은 30분 후에 DPPH를 50% 억제하는데 요구되는 양을 뜻하고, 표시 방법은 시료가 대조군의 흡광도를 1/2로

감소시키는 농도로 표시하였으며, 검체의 농도에 따른 수소 전자 공여능 변화 곡선에 의해 항산화 활성을 측정

하였다. .

<45> 하기 표 4는 해양 심층수 된장의 항산화 활성 측정 결과이다.

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표 4

<46>

<47>

심층수 된장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 된장의 RC50 <48> 값은 783 ㎍, 다시마 무첨

가 심층수 된장의 RC50 값은 2555㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것을

확인할 수 있었고 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인할 수

있었다.

<49> 한편, 하기 표 5는 심층수 고추장의 항산화 활성을 측정한 결과이다.

표 5

<50>

<51>

<52> 심층수 고추장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 고추장의 RC50 값은 537㎍, 다시마 무

첨가 심층수 고추장의 RC50 값은 994㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것

을 확인할 수 있었고 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인

할 수 있었다.

표 6

<53>

<54> 심층수 간장의 항산화 활성을 측정한 결과, 다시마 첨가 심층수 간장의 RC50 값은 637㎍, 다시마 무첨가

심층수 간장의 RC50 값은 1038㎍로 나타났다. 다시마를 첨가함으로써 항산화 활성이 눈에 띄게 증가한 것을 확인

할 수 있었고, 이로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항산화 활성을 증진시킬 수 있음을 확인할 수 있

었다.

<55> <실시예 3> 다시마 첨가 심층수 장류의 항암 활성측정

<56> 세포 단백질 염색을 이용하여 세포증식 및 독성을 측정하는 SRB (Sulforhodamine B) 방법으로 다시마를

첨가한 심층수 장류의 항암 활성을 측정하였다.

<57> 실험을 위해 인간 암세포인 유방암세포(MCF-7), 간암세포(Hep3B), 폐암세포(A549), 위암세포(AGS), 자

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궁암세포(HeLa) 및 인간 정상세포(293)를 한국세포은행(Korea Cell Bank)으로부터 구입하여 배양하였다.

정상세포, 자궁암세포, 유방암세포 및 간암 세포주는 DMEM(Dulbeco’s Modified <58> Eagle Medium) 배지를,

폐암세포와 위암세포는 RPMI-1640 배지를 이용하여 10% 우태아 혈청(Fetal bovine serum), 37℃, 5% CO2에 적응

시켜 각각 배양 시켰다.

<59> 그 후, 배양한 10% 우태아 혈청 및 각각의 폐암세포, 위암세포, 유방암세포, 간암세포, 정상세포 그리

고 자궁암세포를 함유하는 RPMI 1640과 DMEM 배지를 5×10

4

cell/mL 농도로 100㎕씩 웰에 첨가하여 24시간 동안

배양 시킨 후 각각의 배지에 녹인 시료(제조예 1)를 농도별로 100㎕로 첨가하여 48시간 다시 배양하였다. 배양

이 끝난 후 시료와 함께 배양된 세포에 아스피레이터로 상등액을 제거하여 냉장 보관한 10%(w/v) 트리클로로아

세트산(TCA)을 100㎕ 첨가하고 1시간 동안 4℃에서 방치한 다음 증류수로 다섯 번 헹구었다. 행굼이 마친 후,

실온에서 건조하였고 1%(v/v) 초산에 녹인 0.4%(w/v) SRB 용액 100㎕를 첨가하여 세포를 30분간 염색시켰다. 결

합되지 않은 SRB 염색액은 1%(v/v) 초산 용액으로 네 번 헹구어 다시 건조시키고, 10mM 트리스 버퍼(pH 10.5)

100㎕로 염색제를 충분히 녹인 다음 540nm에서 흡광도를 측정하였다.

<60> ① 다시마 첨가 심층수 된장의 항암활성 측정

<61> 다시마 첨가 심층수 된장의 암세포 성장 억제 효과를 측정하기 위해 암세포에 대한 세포독성을 측정하

였다.

<62> 먼저 인간 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 1),

시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 된장의 자궁암 세포에 대한 세포 독성은 71.1%, 다시마 무

첨가 심층수 된장은 68.9%로 다시마 첨가 심층수 된장이 더 높았다. 또한, 다시마 첨가 심층수 된장은 시료 농

도가 증가할수록 자궁암 세포에 대한 세포독성이 증가하는 경향을 보였으며, 60~71%로 가장 높은 세포 독성을

나타냈다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가

증진됨을 확인할 수 있었다.

<63> 인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 2), 농도에

상관없이 다시마 첨가 심층수 된장은 다시마 무첨가 심층수 된장보다 간암세포에 대한 세포 독성이 높게 측정되

었고, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장의 세포독성이 74.4%로 가장 높게 측정되었다.

이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확

인할 수 있었다.

<64> 인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 3), 시료가

최고 농도 1mg/mL일때, 다시마 첨가 심층수 된장의 위암세포에 대한 세포독성이 65.7%로 다시마 무첨가 심층수

된장보다 높은 세포독성을 나타내었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 위암 세포 성장에 대한 심

층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<65> 인간 폐암세포(A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 4), 시료가

최고농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장은 77.3%, 다시마 무첨가 심층수 된장은 58%로 다시마 첨가 심

층수 된장의 세포 독성이 월등히 높았다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포 성장에 대한

심층수 된장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<66> 인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 5), 시

료가 최고 농도 1 mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장은 70% 이상, 다시마 무첨가 심층수 된장은 67.3%로 나

타났다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 유방암 세포 성장에 대한 심층수 된장의 억제 효과가 증

진됨을 확인할 수 있었다.

<67> 마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도 6),

시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장 모두 40% 이하의 낮은

세포독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 정상세포 성장에 대한 다시마 첨가 심층수 된장의 낮은 억제 활성

을 확인할 수 있었다.

<68> 이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할 수

있었다.

<69> ② 심층수 간장의 항암활성 측정(심층수와 코지 비율 1:6 간장)

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심층수와 코지 비율이 1:6으로 제조된 다시마 첨가 심층수 간장의 <70> 항암활성을 측정하였다. 다시마 첨가

심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장 시료의 염도는 16%로 하여 측정하였다.

<71> 먼저 인감 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 7),

시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 자궁암 세포에 대한 세포 독성은 65.8%, 다시마 무

첨가 심층수 간장은 60.8%로 다시마 첨가 심층수 간장이 높았다. 또한, 다시마 첨가 심층수 간장은 시료의 농도

가 증가할수록 세포독성이 증가하는 경향을 보였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁암 세포

에 대한 심층수 간장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<72> 인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 8), 농도에

상관없이 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 간암세포에 대한 세포 독성이 높게 측정되

었다. 특히, 시료 농도가 1mg/mL일 때 다시마 첨가 심층수 간장의 세포 독성이 69.4%로 가장 높게 측정되었다.

이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인

할 수 있었다.

<73> 인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 9), 농도와

상관없이 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 위암세포에 대한 세포독성이 높았다.

또한, 시료의 농도가 증가할수록 위암세포에 대한 세포 독성도 증가하였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨

가함으로써 위암세포 성장에 대한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<74> 인간 폐암세포(A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 10), 시료의

농도가 0.25mg/mL로 낮은 때, 다시마 첨가 심층수 간장은 다시마 무첨가 심층수 간장보다 폐암세포에 대한 세포

독성이 낮았지만, 시료의 농도가 증가할수록 다시마 무첨가 심층수 간장보다 폐암세포에 대한 세포독성이 증가

하였다. 특히, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 폐암세포에 대한 세포독성은 70%이상

의 높은 억제율을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포 성장에 대한 심층수 간장의

억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<75> 인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 성장 억제 효과를 측정한 결과 (도 11),

시료가 최고 농도 1 mg/mL일 때 유방암 세포에 대한 세포독성이 다시마 첨가 심층수 간장은 65%이상으로 다시마

무첨가 심층수 간장보다 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 유방암 세포 성장에 대

한 심층수 간장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<76> 마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 간장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도

12), 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장 모두 정상 세포에

대해 40% 이하의 낮은 세포 독성을 나타냈다. 이와 같은 결과로부터 정상세포의 성장에 대한 다시마 첨가 심층

수 간장의 낮은 억제 활성을 확인할 수 있었다.

<77> 이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할 수

있었다.

<78> ③ 심층수 고추장의 항암활성 측정

<79> 다시마 첨가 심층수 고추장의 암세포 성장 억제 효과를 측정하기 위해 암세포에 대한 세포독성을 측정

하였다.

<80> 먼저 인간 자궁암 세포(HeLa)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도

13), 시료가 최고 농도 1mg/mL 일 때, 다시마 첨가 심층수 고추장의 자궁암세포에 대한 세포독성은 61.5%, 다시

마 무첨가 심층수 고추장은 49.8%로 다시마 첨가 심층수 고추장이 높게 측정되었다. 또한, 농도에 상관없이 다

시마 첨가 심층수 고추장의 자궁암 세포 성장에 대한 억제율은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높았으며, 시

료 농도가 증가할수록 세포독성이 증가하는 경향을 보였다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 자궁

암 세포 성장에 대한 심층수 고추장의 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<81> 인간 간암세포(Hep3B)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 14), 시

료가 저농도일 때, 간암세포에 대한 세포독성은 다시마 첨가 심층수 고추장이 다시마 무첨가 심층수 고추장보다

낮았지만, 시료의 농도가 증가할수록 다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높게 측정

되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 간암세포 성장에 대한 심층수 고추장의 억제 효과가 증진

됨을 확인할 수 있었다.

– 11 –

공개특허 10-2009-0083678

인간 위암세포(AGS)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 <82> 측정한 결과(도 15), 시료

의 농도가 증가할수록 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 세포독성은 증가하였지만,

다시마 첨가 심층수 고추장의 세포독성이 더 높게 측정되었다. 이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 위

암세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<83> 인간 폐암세포 (A549)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 16), 시

료의 농도와 무관하게 다시마 첨가 심층수 고추장의 세포독성은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 높게 측정되

었다. 특히, 시료가 최고 농도 1mg/mL일 때, 다시마 첨가 심층수 고추장은 77.7%로 높은 세포독성을 나타냈다.

이와 같은 결과로부터 다시마를 첨가함으로써 폐암세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확

인할 수 있었다.

<84> 인간 유방암 세포(MCF-7)에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 성장 억제 효과를 측정한 결과(도 17),

시료 농도와 무관하게 다시마 첨가 심층수 고추장은 다시마 무첨가 심층수 고추장보다 유방암 세포에 대한 세포

독성이 높게 측정되었고, 시료가 최고 농도 1 mg/mL일 때, 51.4%로 가장 높았다. 이와 같은 결과로부터 다시마

를 첨가함으로써 유방암 세포에 대한 심층수 고추장의 성장 억제 효과가 증진됨을 확인할 수 있었다.

<85> 마지막으로 인간 정상세포 293에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 세포 독성효과를 측정한 결과(도

18), 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장 모두 40% 이하의 낮은 억제효과를 나타냈다.

이와 같은 결과로부터 정상세포의 성장에 대한 다시마 첨가 심층수 고추장의 낮은 억제활성을 확인할 수

있었다.

<86> 이상, 상기의 결과들로부터 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항암활성 효과가 증진됨을 확인할

수 있었다.

<87> <실시예 4> 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell을 이용한 항암실험

<88> 체중 25g 전후의 웅성 Balb/c 마우스를 각각 실험 군당 5마리씩 정하여 온도 21~26℃, 습도 45~55%로

유지시켰고 조명은 오전 9시에 자동 점등과 오후 9시에 자동 소등하였다. 사료는 삼양유지사료(주)의 마우스용

배합사료(조단백질 22.1%, 조지방 3.5%, 조섬유 5.0%, 회분 8.0%, 칼슘 0.6%, 인 0.4%)를 사용하였고, 물은 증

류수를 공급하였으며 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하였다.

<89> 상기의 Balb/c 마우스의 복강 내에 7~10일간 배양된 sarcoma-180 세포를 복수와 함께 취하여

phosphate buffered saline (PBS)와 함께 원심분리(1,200 rpm, 10 min.)하였다. 원심분리하여 분리된 세포를

다시 PBS에 부유시켜 재차 원심분리하고 상등액을 제거한 후 1.0×10

6

cell/mL가 되도록 종양세포 부유액을 만

들었다. 제조한 부유액을 1 mL씩 복강 주사하여 이식 보존을 하면서 실험에 사용하였다.

<90> 고형암 성장저지 실험은 Brouard 등의 방법으로 실험하였다. 즉, 각 군당 5마리의 마우스의 왼쪽 서해

부에 sarcoma-180 종양세포 부유액 0.2 mL (6.0×10

6

cell/mouse)씩을 피하 이식하고, 24시간 후부터 20일간 매

일 1회씩 제조예 1에서 제조한 시료 용액을 복강으로 투여하여 식이를 섭취시켰다. 종양세포 이식 26~30일째 되

는 날 마우스를 치사시켜 생성된 고형암을 적출한 후 각각의 종양 무게(수학식 1)와 종양 성장 저지 백분율

(Tumor growth ratio, I.R. : %; 수학식 2)를 계산하였다. 대조군의 유의 수준은 p<0.05이다.

수학식 1

<91>

수학식 2

<92>

<93> ① 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 된장의 항암실

험

<94> Sarcoma-180 cell에 대한 다시마 첨가 해양 심층수 된장의 항암효과를 측정하였다.

– 12 –

공개특허 10-2009-0083678

표 7

<95>

시료의 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 <96> 된장의 종양무게와 억제율은 각각

3.8±0.72, 23.0±14.66으로 다시마 무첨가 심층수 된장의 종양 무게와 억제율이 4.27±0.41, 13.49±8.33인

것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고, 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일

때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 된장이 다시마 무첨가 심층수 된장에 비해 종양 무게는 낮았고, 억제율은

높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 된장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다.

<97> ② 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 간장 항암실험

<98> 상기 실시예 4와 같은 방법으로 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell에 대한 해양 심층수

간장의 항암효과를 측정하였다. 이때, 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 염도를 16%를

한정하였다.

표 8

<99>

<100> 시료 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 간장의 종양무게와 억제율은 각각

3.58±0.79, 27.45±16.07로 다시마 무첨가 심층수 간장의 종양 무게와 억제율이 4.19±0.64, 14.87±11.54인

것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일

때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 간장이 다시마 무첨가 심층수 간장에 비해 종양 무게는 낮았고 억제율은

높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 간장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다.

<101> ③ 고형암 성장 저지 확인을 위한 Sarcoma-180 cell을 이용한 다시마 첨가 해양 심층수 고추장의 항암

실험

<102> 상기 실시예 4와 같은 방법으로 Sarcoma-180 cell에 대한 해양 심층수 고추장의 항암효과를

측정하였다.

– 13 –

공개특허 10-2009-0083678

표 9

<103>

<104>

시료 농도가 12.5 mg/kg body weight 일 때, 다시마 첨가 심층수 <105> 고추장의 종양무게와 억제율은 각각

4.04±0.28

ab

, 18.2±5.8로 다시마 무첨가 심층수 고추장의 종양 무게와 억제율이 4.53±0.34, 11.47±8.67인

것에 비해 종양 무게가 현저히 낮았고 억제율은 월등히 높았다. 또한, 시료의 농도가 25mg/kg body weight 일

때도 마찬가지로 다시마 첨가 심층수 고추장이 다시마 무첨가 심층수 고추장에 비해 종양 무게는 낮았고 억제율

은 높게 측정되었다. 따라서 다시마를 첨가함으로써 심층수 고추장의 항암효과가 증대됨을 확인할 수 있었다.

도면의 간단한 설명

<106> 도 1은 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 자궁암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸

그래프이다.

<107> 도 2는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<108> 도 3은 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<109> 도 4는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 폐암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<110> 도 5는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸

그래프이다.

<111> 도 6는 다시마 첨가 심층수 된장과 다시마 무첨가 심층수 된장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<112> 도 7은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 자궁암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸

그래프이다.

<113> 도 8은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<114> 도 9는 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<115> 도 10은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 폐암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

<116> 도 11은 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸

그래프이다.

<117> 도 12는 다시마 첨가 심층수 간장과 다시마 무첨가 심층수 간장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그

래프이다.

– 14 –

공개특허 10-2009-0083678

도 13은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 자궁암세포에 <118> 대한 세포독성 효과를 나

타낸 그래프이다.

<119> 도 14는 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 간암세포에 대한 세포독성 효과를 나타

낸 그래프이다.

<120> 도 15는 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 위암세포에 대한 세포독성 효과를 나타

낸 그래프이다.

<121> 도 16은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 폐암세포에 대한 세포독성 효과를 나타

낸 그래프이다.

<122> 도 17은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 유방암세포에 대한 세포독성 효과를 나

타낸 그래프이다.

<123> 도 18은 다시마 첨가 심층수 고추장과 다시마 무첨가 심층수 고추장의 정상세포에 대한 세포독성 효과를 나타

낸 그래프이다.

도면

도면1

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도면2

도면3

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도면4

도면5

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도면6

도면7

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공개특허 10-2009-0083678

도면8

도면9

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공개특허 10-2009-0083678

도면10

도면11

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도면12

도면13

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도면14

도면15

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도면16

도면17

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도면18

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