한국콩연구회

유전자 재조합 콩 동시검사법 개발 연구

Development of simultaneous detection method for genetically modified soybean

사업명 : 식품 등 안전관리

주관연구기관 : 경희대학교

연구책임자 : 김해영

발행년월 : 2011-11

주관부처 : 식품의약품안전청

원문

http://www.ndsl.kr/ndsl/commons/util/ndslOriginalView.do?dbt=TRKO&cn=TRKO201200007095&rn=&url=&pageCode=PG18

초록

A multiplex polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the detection of 6 events of genetically modified (GM) soybean. The event-specific primers were used from 6 events of GM soybean (RRS, A2704-12, DP356043-5, MON89788, DP305423-1, and A5547-127) and the lectin was used as an endogenous reference gene of soybean in the PCR detection. The specificity of the designed primer pairs was individually assessed by single-target PCR and the expected amplicons were specifically amplified from each target DNAs. The limit of detection (LOD) from the multiplex PCR was measured using GM reference materials (10, 5, 3, 1, 0.5, and 0.1%) mixing genomic DNAs of 6 events of GM soybean with non GM soybean. The LOD value of the multiplex PCR was 0.5% for GM reference materials (400 ng of mixed genomic DNA as template). To validate the multiplex PCR detection method, 30 soybean products (1 cheonggukjang, 4 doenjang, 6 tofu, 2 fried tofu, 2 bean sprouts, 5 soymilk, 3 powdered soybean, 1 powder made of mixed grains, 3 infant formula, 1 bread mix, and 2 snack) were collected from commercial food markets in Korea and USA were analyzed in this study. As a result, 19 soy processed foods (sample no. 1, 2, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, and 30) contained GM soybean (RRS) and 4 processed foods (sample no. 25, 26, 27, and 30) contained GM soybean (MON89788) and sample 30 contained GM soybean A2704-12. To validate the result of multiplex PCR, single PCR was performed using event-specific primers of 6 events of GM soybean for 30 soybean processed foods. Cosequently, there were no differences in the multiplex PCR and single PCR results. These results indicate that this multiplex PCR detection method could be applicable to detect GMO from processed foods.

유전자재조합 콩 6종(RRS, A2704-12, DP356043-5, MON89788, DP305423-1, A5547-127)에 대한 동시 분석을 위해 다중중합효소연쇄반응법을 개발하였다. 유전자재조합 콩 6종에 대한 각각의 event-specific primers가 이용되었고, 콩의 내재유전자로써 lectin이 이용되었다. 각각의 event-specific primers의 특이성이 단일 PCR을 이용하여 평가되었고 예상했던 PCR 산물이 각각의 target DNAs로부터 특이적으로 증폭되었다. 본 연구에서 개발한 다중중합효소연쇄반응법은 유전자재조합 콩 6종과 일반 콩의 genomic DNA을 혼합한 표준시료(10, 5, 3, 1, 0.5, 0.1%)를 이용하여 검정한계치를 확인하였다. 표준시료 400 ng을 template로 하여 multiplex PCR을 실시한 결과 검정한계치(limit of detection)가 0.5%인 것으로 확인되었다. 본 연구에서는 우리나라와 미국의 마트에서 수거한 30개(청국장 1개, 된장 4개, 두부 6개, 유부 2개, 콩나물 2개, 두유 5개, 콩가루 3개, 미숫가루 1개, 영ㆍ유아용조제식 3개, 빵가루 1개, 과자류 2개)의 콩가공식품을 multiplex PCR 분석법을 이용하여 실제 가공식품에 적용 가능성이 있는지에 대한 검증실험을 실시하였다. 결과적으로 19개의 콩 가공식품(시료번호 1, 2, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 26, 27, 28, 30)에 유전자재조합 콩 RRS가 포함되어 있었고, 4개의 콩 가공식품(시료번호 25, 26, 27, 30)에서 유전자재조합 콩 MON89788이 포함되어 있었고, 유전자재조합 콩 A2704-12를 포함하고 있는 제품이 1개(시료번호 30) 확인되었다. 이러한 multiplex PCR 결과의 정확성을 확인하기 위하여 유전자재조합 콩 6종에 대한 event-specific primers를 이용하여 단일 PCR을 실시하였고 동일한 결과를 확인하였다. 이러한 결과로써 본 연구에서 개발한 유전자재조합 콩 6종에 대한 multiplex PCR 분석법이 실제 콩 가공식품 분석에 적용될 수 있을 것으로 판단된다.