한국콩연구회

유전자재조합 대두 및 옥수수의 검출을 위한 면역분석법 개발

Development of Immunoassay Systems for Detection of Genetically Modified Soybean and Corn

사업명 : 보건의료기술개발사업

주관연구기관 : 한국식품개발연구원

연구책임자 : 손동화

발행년월 : 2003-05

주관부처 : 보건복지부

원문

http://www.ndsl.kr/ndsl/commons/util/ndslOriginalView.do?dbt=TRKO&cn=TRKO200400000368&rn=&url=&pageCode=PG18

초록

GM콩의 면역분석법을 개발하고자 특이항체를 생산하고 ELISA의 조건을 확립하였으며, 이를 시료콩의 분석에 적용하였다. GM콩으로부터 클로닝한 CP4-EPSPS 유전자를 대장균에서 발현한 다음, Macro-Perp DEAE Support를 이용하여 정제하였다. 이를 토끼와 생쥐에 면역하여 최종적으로 다클론 및 단클론 항체를 생산하였다. 특히, 선발한 단클론항체(5종)은 모두 IgG, 형이었으며, 항원인식부위가 서로 다른 두 그룹으로 구분되었다. 다클론항체를 이용하여 ELISA 분석법을 확립하였을 때, 경합방식(검출한계: 1μg/mℓ)보다 sandwich 방식(검출한계: 0.1μg/mℓ)의 ELISA가 검출감도면에서 우수하였다. 단클론 및 다클론 항체를 단독 또는 혼합하여 사용하여 확립한 sandwich ELISA의 성능을 비교한 결과, 3번 단클론 항체와 다클론항체를 혼합하여 사용한 경우의 감도가 가장 양호하였다(검출한계: 0.01μg/mℓ) 다음으로 sandwich ELISA 분석법물 원료콩의 GMO 분석에 적용 가능한가를 검토하였다. Phosphate buffered saline (PBS) 2ml을 추출용매로 사용하여 원료콩 0.1~0.2g을 homogenizer (ULTRA TURRAX)로 11,000rpm에서 1분간 처리하고 원심 분리하여 상징액을 취하였다. 이를 다시 PBS Tween-20 (PBST)로 10배 희석하여 sandwich ELISA의 시료용액으로 사용하였다. 원료콩은 수입산 70점, 국산 30점을 분석하였다. 그 결과, 수입콩의 sandwich ELISA 분식치는 크게 두 group으로 나뉘어 높은 CP4-EPSPS 함량과 낮은 CP4-EPSPS 함량으로 구분되었다. 즉, 전자 [38.3±13.6μg/g (n=51)] 는 후자 [5.6±5.2μg /g (n=19)] 에 비하여 월등히 놀은 수치를 보여 CP4-EPSPS를 함유한 GMO인 것으로 추측되었다 (GMO 비율 72.9%). 한편, 국산콩의 CP4-EPSPS 함량은 2.5±2.6μg/g (n=30)으로 나타나 분석한 국산콩은 모두 non GMO인 것으로 추측되었다. 이상과 같이 본 연구에서 개발한 ELISA 분석법은 신속, 간편하게 많은 GM콩 시료의 분석에 활용 가능함을 시사하였다.